この免疫組織化学染色バッファーを作る方法
リン酸緩衝生理食塩水（PBS）は、免疫組織化学（IHC）染色に一般的に使用される緩衝液であり、生物学的研究によく使用されます。 PBSは、リン酸水素ナトリウム、塩化ナトリウムおよび場合によっては塩化カリウムおよびリン酸二水素カリウムを含有する水性塩溶液である。
免疫組織化学的染色
免疫組織化学は、生物学的組織中の抗原に特異的に結合する抗体の原理を使用することによって、組織切片の細胞内のタンパク質などの抗原を検出するプロセスを指す。
免疫蛍光染色は、最初の免疫組織化学染色法であった。
抗原 - 抗体結合反応により蛍光色素を用いて抗体と結合した場合に抗原が見えるようになるこの過程は、蛍光顕微鏡下で特定の波長の光を励起して活性化した場合に起こります。
溶液の浸透圧濃度およびイオン濃度は、人体の浸透圧およびイオン濃度と一致する（等張性である）。
PBSのレシピ
PBSはいくつかの方法で準備することができます。 複数の数式があります。 その中にはカリウムを含まないものもあれば、カルシウムやマグネシウムを含むものもあります。
このレシピは比較的簡単です。 10倍PBSストック溶液（0.1M）用です。 ただし、1Xストック溶液を作成することも、この10Xレシピから始めて1Xに希釈することもできます。
全体のプロセスには約10分かかります。
Tweenを追加するオプションも用意されています。
PBSバッファを作るために必要なもの
- リン酸一ナトリウム（無水）
- リン酸二ナトリウム（無水）
- 塩化ナトリウム
- スケールと重量ボート
- マグネチックスターラーと攪拌棒
- 較正されたpHプローブとpH調整のための適切な溶液
- 1L容積フラスコ
- Tween 20（オプション）
リン酸緩衝生理食塩水（PBS）を作る方法
リン酸二水素ナトリウム（Na 2 HPO 4）10.9g、無水リン酸一水素ナトリウム（NaH 2 PO 4）3.2gおよび塩化ナトリウム（NaCl）90gを秤量する。
1L以下の蒸留水に溶解する。
pHを7.4に調整し、溶液を最終容量1Lにする。
使用する前に10倍に希釈し、必要に応じてpHを再調整する。
1L溶液に5mL Tween 20を加えて、0.5％Tween 20を含むPBS溶液を作製することができます。
PBSバッファを作るためのヒント
PBS溶液を調製した後、室温でバッファーを保管してください。
非無水試薬は置換することができますが、追加された水分子に対応するためにそれぞれの適切な質量を再計算する必要があります。
リン酸緩衝食塩水（PBS）の使用
リン酸緩衝生理食塩水は、ほとんどの細胞に対して等張性および非毒性であるため、多くの用途がある。 それは物質を希釈するために使用することができ、それはしばしば細胞の容器をすすぐために使用されます。 PBSは、例えば、生体分子を乾燥させる様々な方法において、その中の水分子が物質 - タンパク質の周りに構築されるため、希釈剤として使用することができる。 それは "乾燥"され、固体表面に固定化される。
pHは、細胞の破壊を防ぐために、安定していて一貫したままである。
物質に結合する水の薄膜は、変性または他の配座変化を防止する。 カーボネート緩衝液は、同じ目的のために使用することができるが、有効性は低い。
PBSはまた、エリプソメトリーにおけるタンパク質吸着を測定する際に基準スペクトルを取るために使用することができる。