3つの簡単なステップでTBEバッファを作る方法

このバッファーはDNAの電気泳動分離に使用されます

TBE緩衝液は、トリス塩基、ホウ酸およびEDTA(またはトリス - ホウ酸塩-EDTA)からなる緩衝溶液である。 このバッファーは、 PCR増幅、DNA精製プロトコールまたはDNAクローニング実験から生じるDNA産物の分析におけるアガロースゲル電気泳動にしばしば用いられる。

TBE緩衝液は、小さなDNA断片(MW <1000)、例えば制限酵素消化物の小さな生成物の分離に特に有用である。

TBEはより大きなバッファリング能力を有し、 TAEバッファよりもより鮮明な分解能を与える。 TAE緩衝液は、トリス塩基、酢酸およびEDTA(Tris-アセテート-EDTA)からなる溶液である。

TBEは一般にTAEよりも高価であり、DNAリガーゼを阻害するので、その後のDNA精製およびライゲーション工程が意図される場合に問題を引き起こす可能性がある。 以下の3つの簡単な手順で、TBEバッファを作成する方法を学びます。 このバッファを作成するのに約30分以上かかりません。 方法は次のとおりです。

EDTAストック溶液の調製

EDTA(エチレンジアミン四酢酸)溶液は、事前に調製する必要があります。 pHが約8.0に調整されるまで、EDTAは完全には溶液にならない。 0.5M EDTAの500ミリリットルストック溶液については、93.05グラムのEDTA二ナトリウム塩(FW = 372.2)を秤量する。 次にそれを400ミリリットルの脱イオン水に溶解し、NaOHでpHを調整する。 その後、溶液を500ミリリットルの最終容量まで上げます。

TBEのストック溶液を準備する

54gのトリス塩基(FW = 121.14)および27.5gのホウ酸(FW = 61.83)を秤量し、約900mlの脱イオン水中に溶解することにより、TBEの濃縮(5x)ストック溶液を調製する。 次に、0.5M EDTA(pH8.0)20ミリリットルを添加し、溶液を最終容量1リットルに調整する。

この溶液は室温で貯蔵することができるが、古い溶液には沈殿物が形成される。 バッファーをガラス瓶に入れ、沈殿物が形成されたら廃棄してください。

TBEの実用的な解決策を準備する

アガロースゲル電気泳動のために、TBE緩衝液を0.5x(濃縮ストックの1:10希釈)の濃度で使用することができる。 原液を脱イオン水で10倍に希釈する。 最終的な溶質濃度は、45mMトリス - ボレートおよび1mM EDTAである。 緩衝液は、アガロースゲルを流すのに使用する準備が整った。

あなたが必要なもの

TBEのバッファーを作るには、4つの物質だけが必要です。 このリストの残りの項目は機器です。 必要とされる4つの物質は、EDTA二ナトリウム塩、トリス塩基、ホウ酸および脱イオン水である。

装置に関しては、必要に応じてpHメータと校正標準が必要です。 それに加えて、600ミリリットルと1500ミリリットルのビーカーまたはフラスコが必要になります。 あなたの機器の必要性を丸めるには、目盛りのついたシリンダーとスティックバーとスティルプレートが必要です。

使用するラボの目録をチェックして、始める前に必要なものがすべて揃っていることを確認します。 あなたが適切な材料を使い果たしたために解決策を準備する途中で止まらなければならないことよりも悪いことはありません。

あなたのラボが学校または職場にいる場合は、適切な人員に在庫にあるすべての品目があることを確認してください。 そうすることで、最後に時間とエネルギーを節約できます。