いくつかのステップでTAEバッファを作る方法を学ぶ

このバッファーはDNAの動きを研究するために使用されます

TAE緩衝液は、トリス塩基、酢酸およびEDTA(Tris-アセテート-EDTA)からなる溶液である。 これは、 PCR増幅、 DNA精製プロトコールまたはDNAクローニング実験から生じるDNA産物の分析において、アガロースゲル電気泳動に使用される最も一般的なバッファーである。

この緩衝液は、イオン強度が低く、緩衝能が低い。 それは大型(> 20kb)のDNAの電気泳動に最も適しており、頻繁に交換するか、より長い(> 4時間)ゲルの実行時間に再循環する必要があります。

それを念頭に置いて、バッファのいくつかのバッチを検討することができます。

バッファーの作成が簡単で、ステップを迅速に実行することができれば、一度に複数のバッチを作成することは、特に時間がかかりすぎたり、取り除くのが困難であってはいけません。 以下の手順を使用して、TAEバッファを作成するのにわずか30分かかります。 方法は次のとおりです。

EDTAストック溶液の調製

EDTA(エチレンジアミン四酢酸)溶液を前もって調製する。 EDTAは、pHが約8.0に調整されるまで溶液中に完全には進まない。 0.5M EDTAの500ミリリットルストック溶液については、93.05グラムのEDTA二ナトリウム塩(FW = 372.2)を秤量する。 400ミリリットルの脱イオン水に溶解し、水酸化ナトリウム(NaOH)でpHを調整する。 溶液を500ミリリットルの最終容量まで補充する。

TAEのストック溶液を泡立てる

242グラムのトリス塩基(FW = 121.14)を秤量し、それを約750ミリリットルの脱イオン水に溶解することにより、TAEの濃縮(50倍)原液を作成する。

57.1ミリリットルの氷酢酸と100ミリリットルの0.5M EDTA(pH 8.0)を慎重に添加する。 その後、溶液を1リットルの最終容量に調整する。 このストック溶液は室温で貯蔵することができる。 この緩衝液のpHは調整されておらず、約8.5であるべきである。

TAEの実用的な解決策を準備する

1x TAE緩衝液の実際の溶液は、原液を脱イオン水中で50倍に希釈することによって作製される。

最終的な溶質濃度は40mMである。 トリス - アセテートおよび1mM EDTAを含む。 緩衝液は、アガロースゲルを流すのに使用する準備が整った。

バッファに必要なもの

TAEバッファを作成するためには、迅速かつ簡単な命令セットが必要であるため、必要なマテリアルの数は過度ではありません。 EDTA二ナトリウム塩、トリス塩基、氷酢酸が必要です。

バッファーの製造にはpHメーターと校正標準が必要です。 600ミリリットルと1500ミリリットルのビーカーやフラスコ、さらにはメスシリンダーが必要です。 最後に、脱イオン水、撹拌棒、および攪拌プレートが必要です。

ラッピング

学校の現場、職場、または自宅などの別の場所で、バッファーをどこで作る予定ですか? 上記のTAEバッファーのすべてがあることを確認する前に、在庫を確認してください。

むしろ材料費を支払う必要がない場合は、自宅の外にバッファーを入れることをお勧めします。 あなたはオンラインで必要な資料を簡単に注文することができます。また、専門店を訪れることもできます。